text: 细胞生物学实验教大纲
  《细胞生物学实验》教学大纲
  学时:21
  适用专业:生物系各专业
  大纲执笔人:康美玲
  大纲审定人:王洪凯
  细胞生物学实验课程是生命科学学院本科各专业一门重要的必修基础课程，在生命学科的本科教学中有着十分重要的地位
  课程内容包括基础验证和基本技能性实验;综合性实验和开放式、研究型、创新性实验三大类
  基础验证和基本技能性实验主要是配合理论课的教学，使学生加深理解和掌握有关的知识，同时能够规范地掌握细胞生物学研究的基本操作与基本的实验技能
  综合性实验和开放式、研究型、创新性实验，目的旨在培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事科学研究打下坚实的基础
  二、实验的目的与要求
  1. 配合理论课教学，加深和巩固所学的知识
  2. 掌握细胞生物学研究有关的基本技术，学习先进的研究方法和技能
  3. 通过开放式、研究型、创新性实验训练，培养和提高学生的实验设计能力，实验动手能力以及文献查阅、论文写作的能力
  4. 通过开放式、研究型、创新性实验训练，培养学生的科学思维方法，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力
  在实验教学过程中，要求学生除了掌握基本的操作技能外，实验室还做到全开放，为学生提供进行开放式、研究型、创新性研究的场所，学生可以个人或小组的形式根据自己所学知识、兴趣设计研究课题进行实验
  参加学校组织的科技大赛
  血涂片的制备和细胞大小的测量
  认识红细胞及各种白细胞的典型形态，掌握显微测微尺的使用方法
  脂类、DNA、RNA的细胞化学
  了解脂类、两种核酸在真核细胞中的分布
  死活细胞鉴别
  掌握死活细胞鉴别的原理及方法，了解细胞存活率在研究中的应用和意义
  细胞器的分离与观察
  了解细胞器的分离原理，掌握差速离心和密度梯度离心技术
  了解细胞器分离的一般原理方法，观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，熟悉荧光显微镜的使用方法
  了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术
  动物血细胞的电融合技术
  本实验使学生在了解电融合原理的基础上，学会掌握各种细胞悬液的制备及电融合过程的操作
  植物原生质体的分离和培养
  了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度
  细胞凝集反应
  掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理
  实验一 血涂片的制备和细胞大小的测量
  1. 掌握血涂片的制备方法
  2. 认识红细胞及各种白细胞的典型形态
  医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、载玻片、目镜测微尺和镜台测微尺
  1. 学习血涂片的制备方法以及对各种血细胞的形态及染色的观察与鉴别
  2. 学习使用显微测微尺:包括目镜测微尺和镜台测微尺
  实验二 细胞化学实验
  熟悉细胞脂类的显示技术，了解其在细胞中的分布;学习区别定位细胞DNA、RNA的显示方法
  (1)苏木精为碱性染料染细胞核，苏丹红为偶氮脂溶性染料，可显示细胞中的脂类的分布及量;
  (2)甲基绿与DNA双螺旋外侧的磷酸根基团结合力强，结合后阻止派洛宁从碱基之间插入
  甲基绿与DNA的结合产物为绿色
  派洛宁与RNA的结合力强，RNA结构较松散，派洛宁可以插入，从而中和磷酸基团，阻止甲基绿染色，派洛宁与RNA的结合物呈红色，根据颜色的部位可以判断DNA和RNA的定位并且判断两种核酸的相对含量
  水浴锅、冰冻切片机、载玻片等;
  猪肝、花生子叶、
  1. 脂类显示用猪肝切片和花生的超薄切片，学习掌握使用冰冻切片机的操作技术，获得理想的切片;
  2. 对于细胞中DNA和RNA的显示，材料选用猪肝印片，学习如何制备肝印片的片子，而后进行固定、浸洗、染色等即可显示二者在细胞中的分布
  实验三 死活细胞的鉴定
  掌握死活细胞的鉴定方法及原理
  对于死活细胞的鉴定通常采用两种方法:一是荧光排除法;二是染色排除法:采用的染料是台盼蓝与中性红，台盼蓝等很多酸性染料不易通过活细胞，只能将死细胞染色，而中性红为弱减性，特异性在活细胞中积累
  1. 制备口腔颊黏膜上皮细胞的切片至少两张
  2. 计算细胞的存活率
  实验四 叶绿体的分离与荧光观察
  荧光显微镜、组织捣碎机、离心机等;菠菜叶
  1. 学习荧光显微镜、组织捣碎机、离心机等仪器的使用方法
  2. 叶绿体的分离与观察
  3. 菠菜叶徒手切片的观察
  实验五 细胞器的分离与观察
  低温高速离心机、组织捣碎机、显微镜等;猪肝
  由于不同的细胞器大小和密度存在差异，因此不同的细胞器在介质中的沉降系数各不相同
  利用这种性质，我们可以利用分级分离的方法来分离不同的细胞器
  采用差速离心法和密度梯度法两种
  1.组织匀浆
  3.蔗糖密度梯度离心纯化细胞核
  4.通过差速离心进一步的离心制备其他的细胞器
  5.对制备的细胞器进行染色鉴定
  实验六 细胞融合
  PEG用于细胞融合至少有两方面的作用:一可促使细胞凝聚;二是破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核融合细胞
  三、实验材料和工具
  倒置显微镜、 离心机、刻度离心管、水浴锅等;