text: DNA甲基化异常与多囊卵巢综合征的关系及机制研究--《山东大学》
  甲基化是表观遗传学中为人们认识最早也是了解的最清楚地现象。
  本部分研究便是从这些候选基因出发,研究这些多囊卵巢综合征易感基因的甲基化水平在病患之中是否有变化。
  通过采集多囊卵巢综合征患者以及正常受试者的外周血DNA,以重亚硫酸测序的方法检测上述基因启动子区域的甲基化水平,以图找到多囊卵巢综合征中甲基化异常的候选基因。
  结论：通过筛选多囊卵巢综合征候选基因的甲基化水平,我们发现了多囊卵巢综合征患者中LHCGR这一在至殖调节上有重要作用的基因的甲基化水平的异常,为多囊卵巢综合征表观遗传学发病机制提供了证据,为进一步确证LHCGR甲基化水平的异常以及探求其中机理奠定了基础。
  LHCGR是黄体生成素以及绒毛膜促性腺激素的受体,是一种主要在卵巢以及睾丸表达的跨膜G蛋白偶联受体,LHCGR的活化在人类生殖过程中的激素功能有着至关重要的作用。
  既往文献显示,LHCGR的转录活性的调节主要受到其启动子区域CpG位点甲基化水平的影响。
  方法：我们通过密度梯度离心的方法收集IVF-ET过程中不孕患者卵泡液中的颗粒细胞,其中有12份样本来自多囊卵巢综合征患者,12份样本来自年龄匹配的正常受试者,提取DNA后,以重亚硫酸盐测序的方法,检测了颗粒细胞中LHCGR基因启动子区域的甲基化程度,并使用real time qPCR的方法检测了LHCGR的转录水平,且用western blotting的方法检测了LHCGR的表达水平。
  结论：LHCGR基因作为多囊卵巢综合征的重要易感基因,其DNA序列在多囊卵巢综合征患者中并未发现变异。
  方法我们首先利用前期全基因组关联分析的数据和标本,按照rs13405728的基因型挑选90份多囊卵巢综合征标本以及90份正常对照标本,使用焦磷酸测序的方法检测了这些多囊卵巢综合征和健康对照标本的LHCGR基因启动子区域甲基化水平,以分析rs13405728与甲基化水平之间的关系；用直接测序的方法对rs4073366进行基因分型,分析rs4073366是否影响甲基化水平。
  rs4073366则没有明显的对于LHCGR甲基化水平的影响。
  结论rs13405728可以等位基因特异性的影响LHCGR的甲基化水平,而较高的睾酮水平将会导致LHCGR去甲基化的发生,我们在多囊卵巢综合征病人中发现的LHCGR甲基化水平的变化可能是这两个因素所导致的。
  正常细胞功能有赖于表观遗传组的稳态,现在越来越多的研究表明表观遗传组的紊乱与多种人类疾病相关,特别是癌症与复杂疾病。
  目的在本部分研究中,我们将使用Illumina公司的Infinium HumanMethylation450Beadchip来进行全基因组的DNA甲基化水平的分析,具体来说,将检测超过470,000个CpG位点,覆盖99%的RefSeq基因,通过实验,我们将评价外周血基因组甲基化水平与多囊卵巢综合征之间的关系。
  将每100份多囊卵巢综合征或者正常对照标本分别等量混合为一份。
  基因注释以及通路富集度的分析采用Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery (DAVID)实现。