text: 第四章植物器官的培养
  第四章植物器官的培养第四章植物器官的培养第四章植物器官的培养1、器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。
  器官培养的意义:研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成在生产实践上具有重要的应用价值,可在短期内提高繁殖速率,进行名贵品种的快速繁殖;利用茎尖培养可得到脱毒试管苗,解决品种的退化问题,提高产量和质量;将植物器官作诱变处理,用器官培养可得到突变株,进行细胞突变育种等。
  第一节营养器官的培养一、茎尖的培养茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分,进行无菌培养。
  茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
  普通茎尖指较大的茎尖(如儿mm到儿十mm)、芽尖及侧芽。
  普通茎尖培养取材:挑选杂菌污染少,生长不久的茎尖。
  培养的方法和程序培养基多数茎尖培养采用MS作为基本培养基,常用的其他培养基有White,Heller. 培养基中生长素:2,4-D,IAA,NAA,浓度一般用0.1mg/L左右,高于此浓度,往往产生畸变芽或形成愈伤组织。
  茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。
  生长太慢:接种后茎尖不增大,只是茎尖逐渐变绿,出现绿色小点,细胞逐渐老化而进人休眠状态,或者逐渐变褐死亡。
  引起的原因:生长素浓度太低,或是温度过低或过高;生长太快型是接种后茎尖迅速增大,在茎尖基部产生愈伤组织,并迅速增殖,而茎尖不伸长,久之茎尖也形成愈伤组织,从而丧失发育成苗的能力。
  引起的原因:一是生长素浓度过高,引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。
  二是光照太弱或温度太高。
  生长正常型是接种后茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织,茎尖颜色逐渐变绿,并逐渐伸长,叶原基发育成可见的小叶,进而形成小苗。
  培养条件:接种到培养基上的茎尖,置于培养室中培养,每天照光16h,照度1500-30001X,温度通常在25±2°CO继代培养:继代培养可用MS培养基。
  并加入一定的生长素类调节物质,如NAA、IBA等。
  移栽入土在生根培养1个月左右,新梢基部生有较浓密的不定根,长度在l0-15cm左右,就可移栽人土。
  二、 茎尖的培养与无病毒苗的培育热处理脱毒1、热处理法又称温治疗法(theomtherapy)(1)温汤浸渍处理:适用于休眠器官、剪下的接穗或种植的材料,在50C左右的温水中浸渍lOmin至数小时,方法简便易行,但易使材料受伤。
  这是因为生长点、分生组织细胞是活跃分裂的细胞,其区域内无维管束,病毒只能通过胞间连丝传递,赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。
  在切取茎尖时越小越好,但太小则不易成活,过大又不能保证完全除去病毒。
  2、 培养基以White、Morel和MS培养基作为基本培养基,尤其是提高钾盐和铉盐的含量会有利于茎尖的生长。
  剥离茎尖时,应尽快接种。
  将接种好的茎尖置于22°C左右的温度下。
  每天以16h,2000-3000LX的光照条件下培养。
  在低温和短日照下,茎尖有可能进入休眠;所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。
  微茎尖需数月培养才能成功。
  4、 影响微茎尖培养的因素1)外植体大小在最适培养条件下,外植体的大小决定茎尖的存活率,外植体越大,产生再生植株的机会也就越大,而外植体越小脱毒效果越好。
  叶原基的存在与否也影响分生组织形成植株的能力,一般认为,叶原基能向分生组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。